ชุด ELISA ทำงานอย่างไร

วิธีแซนด์วิชแอนติบอดีคู่ 1. แพ็คเกจ: ด้วย 0.05MPH9 แพ็คคาร์บอเนตถูกบัฟเฟอร์เพื่อเจือจางแอนติบอดีให้มีปริมาณโปรตีน 1 ถึง 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เติม 0.1 มล. อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสข้ามคืนลงในรูปฏิกิริยาของแผ่นโพลีสไตรีนแต่ละแผ่น วันรุ่งขึ้นทิ้งสารละลายลงในรูแล้วล้างด้วยบัฟเฟอร์ล้าง 3 ครั้ง ครั้งละ 3 นาที

(เรียกสั้นๆ ว่า การซัก เหมือนเดิมด้านล่าง). 2. เพิ่มตัวอย่าง: เติมเจือจางตัวอย่างที่จะทดสอบ 0.1 มล. ในรูปฏิกิริยาที่บรรจุไว้ข้างต้น-ตามที่กล่าวข้างต้น ฟักเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส จากนั้นจึงล้างออก

(ในเวลาเดียวกันให้ทำช่องว่าง รูควบคุมเชิงลบ และรูควบคุมเชิงบวก). 3. เพิ่มเอนไซม์-แอนติบอดีที่มีป้ายกำกับ: ในแต่ละหลุมปฏิกิริยา ให้เติมเอนไซม์ที่เจือจางใหม่-แอนติบอดีที่มีฉลาก (เจือจางหลังจากการไตเตรท) 0.1 มล.

ฟักไข่ 0.5 ถึง 1 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส แล้วล้างออก

4. เพิ่มการแสดงสีของเหลวของพื้นผิว: เพิ่มการเตรียมชั่วคราวของสารละลายพื้นผิว TMB 0.1 มล., 37 องศา C 10 ถึง 30 นาทีในแต่ละหลุมปฏิกิริยา

5. ปฏิกิริยาสิ้นสุด: เติมกรดซัลฟิวริก 2M 0.05 มล. ลงในแต่ละหลุมปฏิกิริยา. 6. ผลลัพธ์กำหนด: สามารถอยู่บนพื้นหลังสีขาวด้วยตาเปล่าโดยตรงเพื่อสังเกตผลลัพธ์: ยิ่งสีภายในรูปฏิกิริยาเข้มขึ้น ระดับบวกก็จะยิ่งเข้มขึ้น ปฏิกิริยาเชิงลบจะไม่มีสีหรือตื้นมาก ตามสีที่สะท้อนในความลึก ไปจนถึงสีของ

สแกนค่า Od: บนเครื่องทดสอบ ELISA ที่ 450 นาโนเมตร (หากแสดงสี BTS แล้ว 410 นาโนเมตร) ไปยังศูนย์ควบคุมที่ว่างเปล่าที่นำเข้าเพื่อวัดค่า OD ของแต่ละหลุม หากมากกว่าค่า OD ควบคุมเชิงลบที่ระบุ 2.1 เท่า ซึ่งก็คือค่าบวก

กฎหมายทางอ้อม

1. ใช้บรรจุภัณฑ์ที่จะบัฟเฟอร์เพื่อเจือจางแอนติเจนที่ทราบเป็น 1 ถึง 10 มก./มล. ต่อหลุมบวก 0.1 มล. 4 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน

2. ล้าง 3 ครั้งในวันถัดไป

3. เติมตัวอย่างเจือจาง (แอนติบอดีที่ไม่รู้จัก) 0.1 มล. ลงในรูปฏิกิริยาที่บรรจุไว้ข้างต้น- บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 องศา C ล้าง

4. (ควบคุมรูว่าง ลบและบวก) ในรูปฏิกิริยา เติมแอนติบอดีตัวที่สองที่มีฉลากเอนไซม์ที่เจือจางใหม่ (แอนติ-แอนติบอดี) 0.1 มล.

5.37 องศา C ฟักตัว 35-60 นาที ซัก;

6.'ครั้งสุดท้ายที่คุณซักด้วย DDW ขั้นตอนที่เหลือจะเหมือนกับ "วิธีดับเบิ้ลแอนติบอดีแซนด์วิช" ของ 4, 5, 6